pYr-adshuttle-4（穿梭载体）（双表达框结构，hEF1αp后已插入EGFP，CMVp后可插入目的基因）产品信息
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| VXY0398 |
pYr-adshuttle-4（穿梭载体）（双表达框结构，hEF1αp后已插入EGFP，CMVp后可插入目的基因） |
Yrbio |
腺病毒系统
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载体描述
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MCS
Description
- 此载体为双基因表达载体，可以同时表达两个基因，且两个基因不会互相干扰。
- 启动子均为强启动子，一为CMV启动子，一为hEF1α启动子。
- hEF1α启动子后已插入EGFP绿色荧光基因，可作为转染指示标记。
- CMV启动子后可插入外源基因。MCS区可以使用的常用酶切位点已标出。
- 此载体带有Neo抗性基因，可在真核细胞中用G418进行筛选。
Primer
hEF1α-f：
Sequence：5'-GGTTCATTCTCAAGCCTCA-3'
CMV-f（通用引物）：
Sequence：5'-CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG-3'
BGH-r（通用引物）：
Sequence：5'-TAGAAGGCACAGTCGAGG-3'
Propagation in E.coli
- DH5α、JM101、XL1-Blue等均可。
- 抗性为Kan+，浓度为30~50ug/ml。
- Copy number：高（~500）
载体验证
- 在pDoubleEx-EGFP的CMV启动子后插入DsRed-Monomer，构建pDoubleEx-EGFP-moRED。
- 将pDoubleEx-EGFP-moRED转染293细胞，48h后观察荧光，可见多且亮的红色荧光和绿色荧光。
pDoubleEx-EGFP-moRED转染293细胞：普通视野
pDoubleEx-EGFP-moRED转染293细胞：绿色视野
pDoubleEx-EGFP-moRED转染293细胞：红色视野
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